Главная >> Виноградарство >> Инфо >> ОКРАСКА МИКРООРГАНИЗМОВ

ОКРАСКА МИКРООРГАНИЗМОВ

ОКРАСКА МИКРООРГАНИЗМОВ, один из широко применяемых методов микробиологически техники, заключающийся в окраске клеток микроорганизмов спец. красителями.

ОКРАСКА МИКРООРГАНИЗМОВ проводится для выяснения их морфологии, физиологии, состояния, деталей внутреннего строения. Ориентировочная окраска достигается простыми способами окраски, при которых применяется какой-нибудь один краситель: метиленовый синий или водно-спиртовый раствор фуксина. Простыми способами окраски пользуются для обнаружения в микроскопируемом материале микробов, определения их количества, формы и расположения. Препараты, содержащие тканевые и клеточные элементы, лучше красить метиленовым синим, который окрашивает фон препарата значительно слабее, чем тела микробных клеток. При сложных дифференциальных способах окраски пользуются 2 красящими веществами, из которых одна краска является основной, а вторая — дополнительной. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др. Дифференциальное окрашивание позволяет выявить различные клеточные структуры, определить особенности химического состава. Так, содержащиеся в клетках липиды окрашиваются осмиевой кислотой в черный, а Суданом — в красный цвет; метахроматин выпадает в вакуолях в виде красных зерен при окраске нейтральным красным, раствор Люголя окрашивает гликоген в коричневый, а гранулёзу — в синий цвет. Наиболее распространенный метод дифференциальной окраски — окраска по Граму, являющаяся важным диагностическим признаком. Все микроорганизмы можно разделить на 2 группы — грамположительные и грамотрицательные. Дрожжи, молочнокислые бактерии красятся по Граму (т.е. грамположительны), имеют сине-фиолетовый цвет; уксуснокислые бактерии не красятся по Граму — имеют красный цвет. Метод основан на том, что протоплазма одних видов микроорганизмов образует прочное, нерастворимое в спирте соединение йода с красителем; у др. видов это соединение не образуется. Для окраски препарат фиксируют и обрабатывают карболовым раствором генцианового фиолетового, затем раствором Люголя. Препараты для окрашивания готовят на предметных стеклах. Из жидких культур каплю материала петлей наносят на предметное стекло и распределяют по поверхности. Из культуры на плотной среде петлей берут небольшое количество исследуемого материала и растирают в капле воды или физиологии, раствора на предметном стекле. Мазку дают высохнуть на воздухе, затем его фиксируют. Самый простой способ — фиксация жаром. Держа стекло мазком вверх, его трижды проводят через пламя газовой или спиртовой горелки. Во избежание перегрева препарата время фиксации не должно превышать 5—6 с, а время прямого воздействия пламени — 2 с. Для фиксации препаратов применяют также различные химических вещества и соединения: этиловый и метиловый спирты, смесь Никифорова (спирт и эфир для наркоза в соотношении 1:1) и др. При этом стекло с высушенным мазком погружают в склянки с фиксирующим веществом, а затем высушивают на воздухе. Очень распространено прижизненное окрашивание нефиксированных клеток микроорганизмов. Употребление флуоресцентных красителей (например, акридинового оранжевого) в сочетании с люминесцентной микроскопией позволяет различать живые и мертвые клетки микроорганизмов: первые окрашиваются в зеленый цвет, вторые — в красный. О. м. пользуются при определении физиологически состояния дрожжей. Для этого применяют водный раствор метиленового синего (1:10000). Мертвые клетки быстро окрашиваются в синий цвет, живые клетки не окрашиваются. В стадии брожения дрожжевые клетки характеризуются наличием большого количества запасных питательных веществ в виде гликогена и жира. Гликоген окрашивается раствором Люголя в красно-бурый цвет. Стадия голодания характеризуется отсутствием запасных питательных веществ в клетках дрожжей, что выявляется при окрашивании их раствором Люголя в желтый цвет.

Литература: Лабинская А. С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. — 4-е изд. — Москва, 1978.

 
< ОВРАГИ   Окраска ягод винограда >